Diagnóstico laboratorial: Mycoplasma hyopneumoniae

Testes disponíveis:

Patologia macroscópica

• Inspeção visual das lesões pulmonares.

• Prós:
  • Fácil de fazer.
  • Pode avaliar infecções tardias em suínos enviados para abate.
• Contras:
  • Não diagnóstico / patognomônico; muitas outras causas possíveis.
  • Requer outra confirmação de diagnóstico.

Cultivo bacteriano

• Isolamento de organismos vivos de tecidos com lesões ou lavagem broncoalveolar.
• Tipos de amostras: lavagem pulmonar ou broncoalveolar.
• Prós:
  • Critério de referência.

  • Os suínos podem apresentar resultados positivos por 7 a 8 meses (longo período de colonização).

• Contras:
  • Requer um meio de cultura especial (meio Friis).
  • Disponível apenas em poucos laboratórios.
  • Caro.
  • Muito difícil de crescer (muitos falsos negativos).

Imunohistoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antígeno bacteriano.
• Tipo de amostra: tecido pulmonar.
• Prós:
  • Detecta bactérias no local da lesão (boa prova de causa).
  • Os suínos podem apresentar resultados positivos por 7 a 8 meses (longo período de colonização).

• Contras:
  • Deve ser enviada a amostra de tecido correta - o tecido pulmonar deve conter um corte transversal das vias aéreas (células epiteliais brônquicas).
  • Requer um número significativamente maior de bactérias do que a PCR.
  • Avalia apenas uma pequena quantidade de tecido.

Anticorpos fluorescentes (AF)

• Detecta a presença de antígeno bacteriano.
• Tipo de amostra: tecido pulmonar.
• Prós:
  • Detecta o vírus no local da lesão (boa prova de causa).
  • Os suínos podem apresentar resultados positivos por 7 a 8 meses (longo período de colonização).

• Contras:
  • Deve ser enviada a amostra de tecido correta - o tecido pulmonar deve conter um corte transversal das vias aéreas (células epiteliais brônquicas) (Figura 2).
  • Requer um número significativamente maior de bactérias do que a PCR.
  • Avalia apenas uma pequena quantidade de tecido.

Reação em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de sequências específicas de ácido nucleico (DNA) bacteriano.
• Tipos de amostras: pulmão, esfregaço (nasal, laríngeo, traqueobrônquico ou brônquico) ou lavado broncoalveolar.
• Prós:
  • Sensibilidade muito alta (pode detectar pequenas quantidades de bactérias)
  • Várias amostras podem ser agrupadas para aumentar a sensibilidade diagnóstica ao fazer um análise em uma granja.
  • Os suínos podem apresentar resultados positivos por 7 a 8 meses (longo período de colonização).
  • Custo moderado.
• Contras:
  • Não mostra a doença.
  • Os fluidos orais são um tipo de amostra ruim (muitos falsos negativos).

Tabela 1: Resumo esquemático da pesquisa e dos resultados de campo sobre a sensibilidade de diferentes tipos de amostra para o teste de PCR de Mycoplasma hyopneumoniae.

	Sensibilidade relativa	Pooling*
Fluidos orais	-	Não
Hissopo nasal	+	Variável
Hissopo laríngeo	++	Benéfico
Hissopo traqueobronquial	++	Benéfico
Hissopo bronquial	+++	Benéfico
Lavado broncoalveolar	++	Não
Tecido pulmonar	++++	Sim

* Polling ou agrupar amostras pode ser benéfico para aumentar a sensibilidade diagnóstica ao realizar um testes em granjas; não de um único animal.

Ensaio Imunoabsorvente Enzimático (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos por muito tempo.
  • Pode ser usado em casos crônicos.

• Contras:
  • Os anticorpos específicos e o tempo de detecção podem variar ligeiramente entre os vários kits comerciais disponíveis.
  • Não diferencia entre anticorpos maternos e de exposição.
  • O nível de anticorpos não se correlaciona com a proteção.
  • A vacinação não induz soroconversão (altamente dependente da vacina e do ensaio utilizado).
  • Muitos suínos infectados não soroconvertem.
  • Os anticorpos nem sempre são detectados durante todo o período de infecção.
  • Alguma reatividade cruzada com outros Mycoplasmas, especialmente M. flocculare, que não é patogênico e é comumente encontrado em suínos.

Interpretação de resultados:

Patologia macroscópica:

• Positivo: A patologia macroscópica do pulmão pode fornecer um possível diagnóstico.
• Negativo: Os casos iniciais geralmente não apresentam lesões pulmonares extensas.

Cultivo bacteriano:

• Positivo: Confirma a doença.
• Negativo: Negativo, as bactérias não são detectadas se o teste for feito muito tempo após a infecção ou uso de antibióticos, ou simplesmente não podem crescer devido ao crescimento excessivo de outras bactérias (presentes, mas muito difíceis de crescer).

IHC:

• Positivo: As bactérias estão presentes no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou infecção muito antiga para detectar a bactéria ou animal previamente tratado com antibióticos.

AF:

• Positivo: As bactérias estão presentes no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou infecção muito antiga para detectar a bactéria ou animal previamente tratado com antibióticos.

PCR:

• Positivo: A bactéria está presente; não confirma a doença.
• Negativo: Negativo ou infecção muito antiga para detectar a bactéria ou animal previamente tratado com antibióticos.

ELISA:

• Positivo: Anticorpos maternos ou exposição anterior (geralmente 3 a 8 semanas após a exposição) à vacina ou bactérias do ambiente.
• Negativo: Negativo ou infecção que não estimula a soroconversão ou muito recente para ser detectada (geralmente leva de 3 a 8 semanas após a exposição).

Cenários

Suínos em crescimento com tosse crônica:

• Necropsia de 1 a 3 suínos recentemente mortos ou eutanasiados que tiveram com tosse. Avalia macroscopicamente os pulmões para consolidação cranioventral. Colete vários pedaços de pulmão (certifique-se de incluir as vias aéreas na amostra) e fixe-os em formalina para IHC ou AF.
• O percentual de pulmões com lesões está diretamente relacionado ao impacto econômico da doença.

Confirme se os animais de reposição são negativos para Mycoplasma hyopneumoniae

• Certifique-se de que não há sinais clínicos de tosse.
• Colete pelo menos 30 amostras de soro aleatórias de animais de reposição e analise-as por ELISA.

Monitore a excreção na reposição antes da introdução em uma granja de reprodutores positiva ou negativa

• Certifique-se de que não há sinais clínicos de tosse.
• Colete pelo menos 30 amostras de esfregaço laríngeo aleatórias dos animais de reposição. Misture-os em grupos de 5 ou 6 e analise por PCR.