Diagnóstico laboratorial: Ileíte (Lawsonia intracellularis)

Testes disponíveis:

Patologia macroscópica

• Avalia a presença de lesões teciduais que podem sugerir a presença da doença.

• Localização das lesões: íleo terminal (às vezes pode incluir o ceco).

• Existem 3 formas muito distintas da doença:
  • Enteropatia hemorrágica proliferativa (aguda/hiperaguda).
    • Espessamento da mucosa intestinal.

    • Conteúdo hemorrágico com coágulos.

• Adenomatose intestinal suína (crônica sem complicações):
  • Espessamento intestinal corrugado severo.
  • Normalmente sem sangue.

• Enterites necróticas (crônica com complicações):
  • Espessamento intestinal corrugado grave.
  • Membrana fibrinonecrótica sobre o intestino espessado.
  • Normalmente sem sangue.

• Prós:
  • O diagnóstico presuntivo pode ser feito após exame macroscópico dos intestinos.
  • Pode diferenciar as 3 formas diferentes da doença.
• Contras:
  • As lesões não são exclusivas/diagnósticas de ileites; outras doenças podem causar lesões similares.
  • A avaliação do espessamento pode ser subjetiva, especialmente quando as contrações intestinais fazem as paredes intestinais parecerem temporariamente mais espessas do que o normal.

Histopatologia

• Avalia a presença de lesões nos tecidos (espessamento) que podem confirmar a presença da doença.
• Tipo de amostra: tecidos.
• Prós:
  • As lesões histopatológicas são quase diagnósticas:

    • A presença de proliferação de células epiteliais de criptas imaturas pode ser confirmada.

    • Pouca ou nenhuma infiltração de células inflamatórias.

  • Pode detectar formas leves da doença.

• Contras:
  • Os tecidos intestinais de animais mortos recentemente precisam ser fixados com formol.

  • As vezes, a doença pode se segmentar, especialmente nos estágios iniciais.

Imuno-histoquímica (IHQ)

• Detecta a presença de antígeno bacteriano.
• Tipo de amostra: tecidos.
• Prós:
  • Critério de referência.
  • Detecta bactérias no local da lesão (boa prova de causalidade).
  • Pode identificar quantidades baixas, moderadas ou altas de bactérias presentes.
• Contras:
  • Requer uma quantidade significativamente maior de bactérias do que a PCR.

Reação em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de sequências específicas de ácido nucleico bacteriano (DNA).
• Tipos de amostras: tecidos intestinais, esfregaços fecais, fezes.
• Prós:
  • Alta sensibilidade.
  • A quantificação por PCR se associa com a presença de lesões.
  • Custo moderado:
    • As amostras de fezes ou tecidos podem frequentemente ser combinadas para reduzir custos e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente no que diz respeito a relevância clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidade – confirma a presença de bactérias mas não da doença.
  • Não diferencia entre bactéria de vacina viva e infeção por bactéria de campo.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas.
  • Pode utilizar em casos crônicos.
  • Maior sensibilidade de diagnóstico do que o teste de anticorpos fluorescentes indiretos (IFA).
• Contras:
  • Os anticorpos específicos e o tempo de detecção podem variar ligeiramente entre os diferentes kits comerciais disponíveis.
  • Os animais demoram de 2 a 4 semanas, dependendo da carga bacteriana, para se tornarem soropositivos.
  • Não diferencia entre bactéria de vacina viva e infecção por bactéria do ambiente.

Anticorpos fluorescentes indiretos (IFA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas.
  • Pode utilizar em casos crônicos.
• Contras:
  • Menor sensibilidade de diagnóstico que ELISA.
  • Não é viável para um grande número de amostras
  • Os animais demoram entre 2 e 4 semanas, dependendo da carga bacteriana, para se tornarem soropositivos
  • Não diferencia entre bactéria de vacina viva e infecção por bactéria de campo.
  • A confiabilidade é altamente dependente da habilidade dos técnicos.

Interpretação dos resultados:

Patologia macroscópica

• Positivo: Frequentemente, o diagnóstico provável é suficiente.
• Negativo: Sem lesões intestinais macroscópicas.

Histopatologia

• Positivo: Forte associação entre espessamento e doença.
• Negativo: Sem lesões intestinais.

IHQ

• Positivo: A bactéria está presente no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou infecção muito recente (bactéria de crescimento lento) ou muito antiga para detectar a bactéria.

PCR

• Positivo:
  • Ct <20 forte vínculo com lesões intestinais (IHQ) e doença.
  • Ct>30 indica presença de microrganismo mas não se associa com lesões intestinais (IHQ negativo) e, portanto, não é provável que tenha um impacto econômico naquele momento.
• Negativo: Negativo ou bactérias não são detectadas se o teste for feito muito cedo (bactérias de crescimento lento) ou muito tempo após a infecção.

ELISA

• Positivo: Exposição anterior (> 2-4 semanas) a uma vacina ou bactéria do ambiente.
• Negativo:
  • Negativo para vacinas ou bactérias do ambiente.
  • Infecção muito recente para ser detectada (bactérias de crescimento lento).
  • O uso de antibióticos pode inibir o crescimento bacteriano e diminuir a resposta imunológica.

IFA

• Positivo: Exposição anterior (> 2-4 semanas) a vacina ou bactéria do ambiente.
• Negativo:
  • Negativo a vacina ou bactéria do ambiente.
  • Infecção muito recente para ser detectada (bactéria de crescimento lento).
  • O uso de antibióticos pode inibir o crescimento bacteriano e diminuir a resposta imunológica.

Cenários:

Suínos de engorda com diarreia (aguda ou crônica):

• Colete amostras fecais de 10 ou mais animais com diarreia não tratados com antibióticos e submeta-as para PCR em pools de 5.

• Necropsia de 1-3 animais recentemente abatidos ou sacrifício de suínos com diarreia. Avalie macroscopicamente o íleo terminal quanto ao espessamento. Colete uma amostra de íleo e fixe-a em solução de formal para histopatologia e IHQ.

Suínos de engorda que não estão crescendo (crônico):

• Necropsia de 1-3 suínos mortos recentemente ou eutanásia de suínos com diarreia. Avalie macroscopicamente o íleo terminal quanto ao espessamento. Colete uma amostra de íleo e fixe-a em solução de formol para histopatologia e IHQ.

Determinação do momento de exposição:

• Colete amostras de 10-15 animais às 8, 11, 14 e 17 semanas de idade:
  • Duas abordagens para amostragem:
    • Transversal – coleta de diferentes faixas etárias ao mesmo tempo (você obtém resultados mais rápido).
    • Longitudinal –coleta dos mesmos animais ao longo do tempo (resultados mais precisos são obtidos).
  • Análises de amostras de soro mediante ELISA (preferível) o IFA.

    Análise de amostras fecais por PCR em pools de 5.