Diagnóstico laboratorial: doença do edema

Testes disponíveis

Cultivo bacteriano

• Isolamento de organismos vivos

• Tipo de amostra: fezes, conteúdo intestinal.

• Prós:
  • As bactérias são fáceis de cultivar em 1 dia.
  • Fácil para fazer em qualquer laboratório (mesmo interno).
  • Custo relativamente baixo.
• Contras:
  • Algumas E. coli formam parte da flora intestinal normal.
  • Os suínos tem diferentes E. coli ao mesmo tempo.

  • Se os suínos forem previamente tratados com antibióticos, isso pode prevenir o crescimento bacteriano.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma)

• Teste in vitro: capacidade de um organismo vivo crescer sob baixa concentração específica de diferentes antimicrobianos.
• Tipo de amostra: fezes, conteúdo intestinal.
• Prós:
  • Identificação de susceptibilidade ou resistência de cepas específicas a antimicrobianos comuns.
  • Identificação de tendências de resistência aos antimicrobianos.
• Contras:
  • Requer um isolado bacteriano.
  • Os testes in vitro podem diferir ligeiramente dos resultados in vivo.
  • Alguns antimicrobianos específicos podem não ser incluídos ou exigir testes especiais separados.

  • Custo moderado.

Histopatologia

• Avalia a presença de lesões em tecido (danos) que podem confirmar a presença da doença. As vezes, a presença de organismos também podem ser detectada diretamente (bactérias e parasitas) ou indiretamente (vírus) usando colorações especiais adicionais.

• Tipo de amostra: tecidos.

• Prós:
  • Associa a adesão bacteriana com o dano intestinal.
  • Não necessita coloração especial.
• Contras:

  • Os tecidos intestinais devem ser fixados com formaldeído dentro de 15 minutos após a morte do animal, pois o tecido intestinal se decompõe rapidamente.

  • A doença pode se segmentar, portanto, várias amostras intestinais devem ser enviadas.

Genotipagem

• Técnica de PCR (reação em cadeia da polimerase) que detecta a presença de uma sequência específica de ácidos nucléicos (DNA) associada a genes de virulência conhecidos.

• Prós:
  • Realizado mediante PCR; fácil de fazer.
  • Ajuda a identificar a patogenicidade ao detectar a presença de genes (não necessariamente a expressão de genes) associados com fatores de virulência.
    • Genes de toxinas: EAST1, LT, STa, STb, Stx1, Stx2, Stx2e.
    • Genes de Pilus: F18, F41, K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6).
    • Genes de adesinas: AIDA, EAEA, PAA
  • Facilita a seleção adequada da vacina (combinando pili correto)
  • Ajuda a confirmar que o isolado possui genes para a doença do edema.

Genes de E. coli detectados mediante genotipagem por PCR e por sua função. Os genes destacados em vermelho são importantes para o diagnóstico da doença do edema.

Gen	Tipo	Descrição
EAST1	Toxina	A toxina intestinal se liga ao mesmo receptor e estimula a mesma via secretora que a Sta (a causa da diarreia não está bem estabelecida)
LT	Toxina	Toxina Intestinal que estimula a secreção intestinal
STa	Toxina	Toxina intestinal que estimula a secreção intestinal principalmente em suínos jovens (diminui a absorção de água e eletrólitos)
STb	Toxina	Toxina intestinal que estimula uma diarreia secretora, principalmente em suínos mais velhos (aumenta a secreção de enterócitos)
Stx1	Toxina	A toxina intestinal pode ser encontrada em cepas patogênicas e não patogênicas
Stx2	Toxina	A toxina intestinal pode ser encontrada em cepas patogênicas e não patogênicas
Stx2e	Toxina	Toxina sistêmica que induz dano vascular e doença do edema
F18 (F107)	Adesina	Pili (fimbria) usada para fixação que está presente após os 20 dias de idade e comumente associada a diarreia pós-desmame e doença do edema.
F41	Adesina	Pili (fimbria) usada para fixação principalmente em recém nascidos.
K88 (F4)	Adesina	Pili (fimbria) usada para fixação em recém-nascidos até animais mais velhos.
K99 (F5)	Adesina	Pili (fimbria) usada para fixação principalmente em recém nascidos.
987P (F6)	Adesina	Pili (fimbria) usada para fixação principalmente em recém nascidos.
AIDA	Adesina	"Adesina envolvida na adesão difusa" não fimbrial, mas comumente encontrada junto a F18
EAE	Adesina	Adesina não fimbrial que contribui para as lesões de adesão e eliminação ("attaching-and-effacing")
PAA	Adesina	Adesina não fimbrial essencial para que se produza as lesões de adesão e eliminação ("attaching-and-effacing")

• Contras:
  • Requer isolamento bacteriano.
  • Os suínos podem ter mais de uma cepa ao mesmo tempo, portanto, temos que confiar que isolamos a cepa correta.
  • Preço moderado, mas normalmente apenas um isolado é analisado.

Interpretação dos resultados:

Cultivo bacteriano:

• Deve ser uma E. coli hemolítica.
  
• Pureza:
  • Crescimento puro: altamente sugestivo de que está contribuindo para a doença.

  • Crescimento misto: valor questionável.

• Quantidade:
  • Alta: altamente sugestivo de que está contribuindo com a doença.
  • Moderada: interpretação variável.
  • Baixo: valor questionável (poderia ser um contaminante).
  • Sem crescimento: Animal possivelmente tratado previamente com antibióticos ou agente sem contribuição significativa.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma):

• Suscetível: possível boa opção de tratamento se o antimicrobiano puder atingir o tecido-alvo.
• Resistente: tem que selecionar um antimicrobiano diferente.
• CIM: se a (concentração inibitória mínima) for realizada, deve-se garantir que o antimicrobiano selecionado atinja o valor da CIM indicado no órgão-alvo.

Histopatologia:

• Positivo: Forte associação como causa se for capaz de demonstrar lesões intestinais com E. coli aderindo as células epiteliais.

• Negativo: Sem lesões intestinais.

Genotipagem:

• A genotipagem é necessária para confirmar que o isolado possui fatores de virulência associados à doença edema.

  • Deve ser F4 ou F18.
  • Deve ter a toxina shiga (Stx2e).

Cenário
Suínos com diarreia pós- desmame:

• Colete swabs retais de 2 ou mais animais com diarreia, não tratados com antibióticos e envie-os para cultura bacteriana, antibiograma e genotipagem

• Eutanásia 1-3 leitões com diarreia que não tenham recebido tratamento. Colete imediatamente 3 amostras de intestino de cada leitão e coloque-as em solução de formaldeído. Colete amostras frescas de intestino para enviá-las refrigeradas para cultura bacteriológica, antibiograma e genotipagem.